Réaction hémagglutination indirecte (Riga).

Riga est utilisé en deux versions: avec connaître AG pour détecter avec connu à la section pour détecter AG. Cette réaction est spécifique et utilisée pour diagnostiquer les maladies causées par des bactéries et RicketTSIA. Pour Riga, des diagnosticums d'érythrocyte sont utilisés, préparés par adsorption sur les érythrocytes AG ou à l'objet de l'objectif de l'étude (Fig. 10.3). Dans des cas positifs, le degré d'agglutination d'érythrocytes a noté les avantages. Quatre plus sont évalués par une réaction ayant un type de film mince de globules rouges de liaison (parapluie) couvrant le fond du tube; La présence d'un film avec des bords de dentelle de Festral est désignée par deux plus. Le titre prend la dilution limite du matériel à l'étude, ce qui a provoqué l'agglutination de globules rouges dans deux plus.

Figure. 10.3.

1 - érythrocytes, 2 - AG Erythrocyte, 3 - AG conjugué, 4 à

RGA et la réaction de freinage de l'hémagglutination (RTHA).

Comme on l'a déjà noté, la base de la RGA est la capacité des érythrocytes à coller avec adsorption de certains AG. FLUIDE ANTICIOTIQUE, SUSPENSION DES COTEURS D'ACCUEILLIQUES ACTIVES DE CHŒUR D'EMBRYOS DE POULET, DE SUSPENSION ET D'EXTRAITS DES CROPS OU DES ORGANES D'ANIMAUX INFÉTUISSANT AVEC VIRAUS, Matériau infectieux natif est utilisé comme matériau étudié pour l'hémagglutination. Le RGA n'est pas une réaction sérologique, car elle se produit sans la participation du sérum immunitaire et est utilisée pour sélectionner la dilution de travail de l'AG pour la RTGA ou la présence de AG (virus) dans le matériau à l'étude (par exemple, avec la grippe ). Les réactions utilisent des érythrocytes d'animaux, des oiseaux, une personne avec I (0) par un groupe de sang. Pour former une RGA approximative sur le verre de sujet, une chute de 5% de la suspension des globules rouges et une goutte du matériau de test est complètement mélangée. Avec un résultat positif, après 1-2 min, l'apparition d'une agglutination de flutter d'érythrocytes est observée. Pour la production de RGA dans la rangée lancée dans les trous des comprimés de polystyrène, une augmentation à la double croissance des matériaux étudiés sur une solution physiologique dans un volume de 0,5 ml est préparé. Dans tous les tubes à essai, 0,5 ml de 0,25 1% de la suspension des érythrocytes sont amenés. Les résultats sont pris en compte après le règlement complet des globules rouges sous contrôle (globules rouges + solution saline). La réaction est prise en compte par la nature du sédiment des érythrocytes. Dans des cas positifs, le degré d'agglutination est noté par des plus. Quatre plus sont évalués par la réaction ayant un type de film mince provenant des érythrocytes liés couvrant le fond du tube à essai (parapluie), la réaction avec les lumières du film est notée par trois plus, la présence d'un film à la dentelle fêtrée Les bords des érythrocytes liés sont désignés par deux plus, un sédiment floconneux de globules rouges, entourés d'une zone de surnom d'érythrocytes agglutiné, correspond à un plus. Les sédiments d'érythrocytes ont fortement décrit, indiscernables du contrôle, montrent l'absence d'agglutination. Le titre prend la limite de reproduction du matériau de test, ce qui a provoqué l'agglutination d'érythrocytes en deux plus. Avec un résultat positif de la RGA, l'étude se poursuit, déterminant le type de virus sélectionné à l'aide de SERA spécifique à Type. Le rtha est basé sur la propriété d'antisérum pour supprimer l'hémagglutination virale, car le virus neutralisé par le spécifique pour perd la capacité d'agglutinez les globules rouges. Dans la saisie indicative des virus, utilisez une méthode d'égouttement sur le verre. Pour la mise en place finale de l'affiliation de l'échantillon du virus dédié et du titrage de AT dans les sérums, mettez le déploiement rtha dans des tubes à essai ou dans des puits. À cette fin, deux fois de dilutions de sérums sur une solution physiologique sont préparées et en bouteilles de 0,25 ml. Un seul matériau contenant le virus est ajouté aux dilutions sériques et une chute de 1% de la suspension des épitocytes est ajoutée. Lorsque vous utilisez RTHA pour déterminer le type de virus, des sérums spécifiques à un type sont utilisés, qui sont ajoutés à un volume égal d'élevage de travail AG. L'appartenance typique du virus sélectionné est montée en fonction du sérum immunitaire spécifique, qui a montré le titre le plus élevé à ce virus. Rga et rha sont largement utilisés pour diagnostiquer infections virales (encéphalite de tiques, grippe, etc.) afin de détecter de manière spécifique et d'identifier de nombreux virus selon leur AG.

Accueil → Analyses → Méthode immunologique → Réactions d'hémagglutination (méthode immunologique)

Réactions d'agglutination Basé sur l'interaction du réactif (anticorps) avec des antigènes à la surface des cellules ou des particules étrangères. En conséquence, des agrégats de grande taille sont formés, qui tombent dans le précipité et peuvent être vus même à l'œil nu. De cette manière, le groupe sanguin est déterminé selon le système AVO, la présence d'un rhésus de celui-ci et d'autres. Il s'agit d'une méthode de diagnostic plus sensible en comparaison avec les réactions de précipitation, car le volume de précipité (Agglutinat) dépasse le volume. de précipité.

Hémagglutination directe

La réaction de l'hémagglutination directe (RPGA) est utilisée pour identifier l'antigène de surface de microorganismes et d'érythrocytes, ainsi que des anticorps pour eux.
Au sérum standard contenant des anticorps, le matériau (sang) est ajouté. Le taux de réponse directe de l'agglutination est associé à la quantité de matériau à l'étude, à la quantité et à la concentration de sérum, la température ambiante.

Hémagglutination indirecte

La réaction de l'hémagglutination indirecte est effectuée pour détecter les anticorps dans le sang du patient à l'aide de diagnosticum d'érythrocyte. Le réactif est des érythrocytes, sur la surface qui se trouve un antigène (protéines de microorganismes, toxines, allergènes, etc.).
Le sérum du patient est élevé par une solution de chlorure de sodium de 0,9%, puis un diagnosticum érythrocytaire est ajouté et le résultat est suivi. Cette méthode de diagnostic extrêmement sensible révèle des antigènes même en petites concentrations.

Réaction d'hémagglutination (RGA).

En laboratoire, deux différents par le mécanisme d'action par les réactions de l'hémagglutination.

Le premier RGA fait référence à sérologique. Dans cette réaction, les érythrocytes sont agglutinisés lorsqu'ils interagissent avec les anticorps correspondants (hémagglutinines). La réaction est largement utilisée pour déterminer les groupes sanguins.

La deuxième RGA n'est pas sérologique. En elle, la liaison des globules rouges ne provoque pas

anticorps et substances spéciales formées par des virus. Par exemple, les agglutines de virus de la grippe Les érythrocytes des poules et des cobayes, le virus de la poliomyélite - RAM Erythrocytes. Cette réaction vous permet de juger de la présence d'un virus dans le matériel à l'étude.

La réaction est effectuée dans des tubes à essai ou sur des plaques spéciales avec des puits. Le matériau étudié pour la présence d'un virus est divorcé par une solution isotonique de 1:10 à 1: 1280; 0,5 ml de chaque dilution est mélangé avec un volume égal de 1 à 2% de la suspension d'érythrocyte. Dans le contrôle de 0,5 ml d'érythrocytes mélangés à 0,5 ml de solution isotonique. Tubes à essai Mettez 30 minutes dans le thermostat et les plaques sont laissées à la température ambiante pendant 45 minutes.

Résultats comptables.Avec un résultat positif de la réaction au bas du tube à essai ou du puits, le sédiment d'érythrocytes avec des bords de Festral ("parapluie"), couvrant tout le fond des puits. Avec un résultat négatif, les érythrocytes forment un précipité dense avec des bords lisses ("bouton"). Le même précipité devrait être en contrôle. L'intensité de la réaction exprime des signes "+".

Réaction d'hémagglutination

Le titre du virus est la dilution maximale du matériau dans lequel l'agglutination se produit.

Réaction de freinage de gemagglutination

Il s'agit d'une réaction sérologique dans laquelle des anticorps antiviraux spécifiques, interagissant avec le virus (antigène), la neutralisent et priver la capacité d'agglutiner les érythrocytes, c'est-à-dire que la réaction d'hémagglutination est inhibée. Cette réaction vous permet de déterminer le type et le type de virus.

Formulation de réaction.0,25 ml de sérum antiviral est mélangé avec une taille égale d'un matériau contenant le virus. Le mélange secoue et placé dans un thermostat pendant 30 minutes, après quoi 0,5 ml'1-2% de la suspension d'érythrocyte est ajouté.

Résultats comptables.Avec la déclaration d'expérience correcte dans le contrôle des globules sériques et rouges, "bouton" doit être formé - il n'y a pas d'érythrocyte agglutinant du facteur; Dans le contrôle de l'antigène, le parapluie est formé - le virus a provoqué une agglutination de globules rouges. Si le sérum est homologue pour le virus étudié, le "bouton" est formé - le sérum neutralisé le virus.

Réaction de l'hémagglutination indirecte

La réaction de l'hémagglutination indirecte (passive) (Riga) est basée sur le fait que les érythrocytes, si leurs surfaces sont adsorbées par l'antigène soluble, acquièrent la capacité d'agglutiner lorsqu'ils interagissent avec des anticorps à l'antigène adsorbé.

Formulation de réaction.Le sérum est chauffé pendant 30 minutes à 56 ° C, élevé séquentiellement dans le rapport de 1:10 - 1: 1280 et en bouteille 0,25 ml dans le tube ou des puits, où 2 gouttes d'érythrocytes avec des antigènes adsorbés sur elles sont ajoutées.

Les contrôles:le silence des érythrocytes avec des antigènes adsorde sur eux avec un sérum évidemment immunitaire, la suspension d'érythrocytes avec des antigènes adsorbés sur eux avec un sérum normal; Silence des érythrocytes normaux avec test de sérum. Dans le premier contrôle, l'agglutination devrait se produire, dans les deuxième et troisième, cela ne devrait pas être.

Questions de contrôle.

1. Que fait la rétroaction positive du RGA entre les érythrocytes et le matériau étudié pour la présence d'un virus?

2. La réaction d'agglutination de globules rouges survient-elle si le virus et le sérum correspondant leur ajouteront-ils? Quel est le nom de la réaction qui détecte ce phénomène?

Numéro de travail pratique 12.

Compléter la réponse contraignante.

La réponse contraignante du compliment (RSK) est basée sur le fait que le complexe spécifique à l'antigène est toujours adsorbant sur lui-même (Lié).

Cette réaction est largement utilisée pour identifier les antigènes iv des sérodiagnostiques des infections, en particulier des maladies causées par des spirochètes (réaction VASSERMAN), de la rickettsia et des virus.

Réaction sérologique complexe RCS-Complexe. Il comprend le complément et deux systèmes antigène antigène. Essentiellement, ce sont deux réactions sérologiques.

Le système principal-principal est constitué d'antigène et d'anticorps (un connu, etc. Non). Il a ajouté une certaine quantité de complément. Conformément à l'antigène et aux anticorps de ce système, ils se connecteront et connectent le compliment. Le complexe résultant est petit et non visible.

La formation de ce complexe sera reconnue à l'aide du deuxième système d'hémolyte ou d'indicateur. Il comprend des érythrocytes RAM et un sérum hémolytique correspondant à eux (anticorps), c'est-à-dire Complexe imide prêt. Dans ce système, la lyse d'érythrocytes ne peut se produire que dans la présence de complément. Si le complément est connecté par le premier système, dans la deuxième hémolyse du système ne sera pas. Pas de complément libre. L'absence d'hémolyse (le contenu du tube boueux ou au fond de ses sédiments des érythrocytes) enregistre comme résultat positif de RSK.

Si l'antigène ne correspond pas à l'anticorps dans le premier système, le complexe immunitaire n'est pas formé et le compliment restera libre. Le libre-échange, le compliment participe au deuxième système, provoquant une hémolyse, le résultat du négatif RSK (le contenu des tubes transparents - «sang laque»).

Composants, complément de réactions de liaison:

1. antigène - généralement lysat, extrait, gapten,

moins que la suspension des microorganismes.

2. Anticorps - Patient sérique.

3. Complément - cobayes sériques.

4. antigène - Érythrocytes RAM.

5. Anticorps - hémolyasine aux érythrocytes de la RAM.

6. Solution isotonique.

Compte tenu du fait qu'un grand nombre de composants complexes participent à RSK,

ils doivent être préalablement nettoyés et pris dans la réaction en quantités précises et à des volumes égaux: 0,5 ou 0,25, moins fréquemment de 0,2,1,25 ou 1,0 ml (de gros volumes donnent un résultat plus précis). Le titrage des composants réactionnels est effectué dans le même volume dans lequel l'expérience placée, le remplacement des ingrédients manquants par une solution isotonique.

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La réaction de l'hémagglutination indirecte ou passive (RNG ou RPGA) est plus sensible et spécifique que la réaction de l'agglutination. Cette réaction est également utilisée dans deux directions.

1) Pour détecter les anticorps dans le sérum sanguin du patient, des diagnosticums d'érythrocyte dans lesquels l'antigène adsorbique se trouve à la surface de l'érythrocyte traité avec une tanine. En ce qui concerne cette réaction, le terme RPGA est plus probable.

Le sérum de test est élevé dans les puits de plastique-coujs et ajoutez des diagnostics érythrocytains. Avec une réaction positive, un film mince sur les murs des puits apparaît sous la forme d'un "parapluie de la brogre", avec une réaction négative - un sédiment dense de rocytes errants sous forme de "bout".

2) Pour détecter des toxines et des antigènes bactériens dans le matériau IS-latult, des ticulbles de diagnostic d'érythrocyte précieuses sont utilisées, obtenues par adsorption d'anticorps sur les globules rouges. Dans la suppression de cette réaction, le terme de cycle est plus souvent utilisé. Par exemple, l'antigène de la peste, la diphtérie exotoxine, l'exotoxine de botulinum est détectée à l'aide de anticiations.

Qu'est-ce que les diagnostics érythrocytains? Qu'est-ce que les diagnostics érythrocytains majeurs?

Les diagnosticums d'érythrocyte sont des érythrocytes (traités avec une tannine ou une formoline) avec des antigènes adsorbés sur eux extraits de bactéries et sont utilisés dans le RPGA (réaction passive d'hémagglutination). Dans le cas où RPGA est utilisé pour détecter l'antigène dans la décharge des patients, dans les tissus, etc., utilisez "un diagnostic antihibe", c'est-à-dire des érythrocytes sensibilisés par des anticorps.

En anneau, des anticorps sériques à l'aide d'un diagnosticum antigénique d'érythrocyte, qui sont des érythrocytes avec des antigènes adsorbés sur eux sont détectés.

Méthodes de formulation de réaction. Réaction de coaggglutination.

- Fixation d'érythrocyte avec formaldéhyde ou glutar, ou aldéhydes acryliques. Ces érythrocytes traités restent depuis longtemps. Plus souvent à cet effet, les érythrocytes de la RAM, de l'homme, des poulets, etc.
- Traitement des érythrocytes fixes avec une solution de tanin. En conséquence, les globules rouges acquièrent la propriété de manière irréversiblement adsorbée sur ses protéines de surface (virus et anticorps);
- sensibilisation des globules rouges antagoniques avec des virus ou des anticorps.

Réaction de coaggglutination (RKA)

La réaction de coaggglutination est utilisée pour déterminer les antigènes à l'aide d'anticorps adsorbés sur des cellules de staphylococciques de protéines (diagnostics alimentaires).
La protéine A a une affinité pour le fragment FC des immunoglobulines, ce sont donc de telles bactéries traitées avec un sérum de diagnostic immunitaire sont non spécifiquement adsorbées par des anticorps sériques, qui interagissent ensuite avec des centres actifs avec des microbes appropriés isolés à partir de patients. À la suite d'une coaggglutination, des flocons constitués de staphylocoques, des anticorps de sérum de diagnostic et du microbe déterminé par le microbe sont formés.

Sérums agglutinants: ce qu'ils contiennent; comment ils sont obtenus, pour lesquels ils sont appliqués; Qu'est-ce qu'un titre de sérum agglutinant?

L'agglutination sérique est obtenue par vaccination de lapins (intraveineuse, sous-cutanée ou intrapéritonéale) par la suspension de bactéries tuées, en commençant par une dose de 200 millions, puis de 500 millions, 1 milliard, 2 milliards, des corps microbiens dans 1 ml, avec des intervalles de 5 journées. 7-8 jours après la dernière vaccination prennent du sang et déterminer le titre des anticorps.

Le titre du sérum d'agglutination s'appelle la dilution maximale du sérum, dans laquelle l'agglutination avec le microorganisme correspondant se produit.

Les sérums agglutinants sont utilisés dans l'identification du microbe dans la réaction étendue de l'agglutination.

Réaction d'hémagglutination (RGA)

Si le microorganisme étudié est agglutiné par un sérum sur le titre ou jusqu'à la moitié de la valeur de titre, il peut être considéré comme appartenant à l'appareil, dont le nom est indiqué sur l'étiquette d'ampoule.

Quelle est la différence entre les sérums agglutinants polyvalents et monorcepteurs); Pourquoi, lors de la vaccination des microbes de lapin d'une espèce, le sérum contenant des anticorps à plusieurs antigènes?

Monorceptor sérums sérums contenant des anticorps d'outils-co à un antigène et sérum polyvalent, donnant la réaction de la glutation Ag avec deux trois bactéries relatifs qui ont un antigène commun. Les sérums agglutinants sont utilisés pour identifier les micro-organismes dans la réaction de l'agglutination. L'inconvénient d'un tel sérum est qu'ils sont correctement donnés à des réactions de groupe d'agglutination, car Ils contiennent une anti-titlea à des bactéries ayant des antigènes communs.

Réaction d'hémagglutination. Description et application

Il est basé sur le fait que les érythrocytes sur lesquels les antigènes sont pré-adsorbés, la capacité d'agglutiner en présence de sérums homologues (anticorps) est acquis.

Les érythrocytes effectuent en même temps le rôle des transporteurs avec des déterminants spécifiques, dont l'agglutination se produit à la suite de la réaction de l'anticorps antigène +.

Les érythrocytes, à la surface de laquelle des antigènes sont fermement attachés, appelés diagnosticum antigénique d'érythrocyte ou érythrocytes, antigène sensibilisé.

Un autre type d'anticorps terlandais et une agglutination ultérieure se produit à la surface des érythrocytes, puis leur agglutination se produit en présence d'un antigène homologue. Dans ce cas, de tels érythrocytes sont appelés diagnostic antihibe, d'érythrocytes, d'érythrocytes, d'anticorps sensibilisés.

Sur la base de ces deux approches méthodologiques fondamentales, de nombreuses modifications de bagues sont développées et utilisées. Ainsi, lorsque les transporteurs utilisent de petites particules de latex standard. Dans ce cas, la réaction est appelée la réaction de l'agglutination de latex (RLA) ou de la staphylococcie d'or est utilisée - la réaction de la coaggglutination, etc. Habituellement, les diagnosticums d'érythrocyte sont préparés aux entreprises de l'industrie biologique et dans les laboratoires de diagnostic expérience principale Rf.

La préparation des diagnosticums d'érythrocyte comprend les étapes suivantes:

• fixation d'érythrocytes avec formaldéhyde ou glutar, ou aldéhydes acryliques. Ces érythrocytes traités restent depuis longtemps. Plus souvent à cet effet, les érythrocytes de la RAM, de l'homme, des poulets, etc.
• traitement des érythrocytes fixes avec une solution de tanin. En conséquence, les globules rouges acquièrent la propriété de manière irréversiblement adsorbée sur ses protéines de surface (virus et anticorps);
• sensibilisation des globules rouges bronzés avec des virus ou des anticorps.

Il convient de noter que les méthodes de préparation des diagnosticums d'érythrocyte pour les infections virales sont différentes.

La méthodologie de Rung pour détecter et déterminer le titre d'anticorps est la suivante:

• les dilutions sériques 2-pliales séquentielles Ajoutez des doses égales d'érythrocytes sensibilisées par l'antigène;
• le mélange est autorisé pendant 2-3 heures à la température ambiante ou à 16-18 heures à 4 ° C;
• compte tenu des résultats. Si le sérum contient des anticorps au virus, qui sont sensibilisés aux globules rouges, sont observés par hémagglutination, estimée dans les croix.

Pour le test d'anticorps dans le sérum, la reproduction sérique la plus élevée est prise, qui fournit toujours une hémagglutination au moins deux croix.

RF est accompagné de tous les contrôles pertinents. Généralement mettre une réaction de micrométode.

Bague vous permet de résoudre les tâches de diagnostic suivantes:

• détecter des anticorps et déterminer leur titre de sérum avec un diagnosticum antigénique d'érythrocyte connu;
• détecter et identifier un virus inconnu à l'aide d'un diagnostic d'antihibe érythrocyte connu.

Les avantages de la région rlandiscitation: une sensibilité élevée, une simplicité de techniques de performance et de la réponse rapide. Cependant, il est important de noter qu'il existe de grandes difficultés dans la préparation de diagnosticums d'érythrocyte stables (une grande dépendance à la pureté des composants utilisés, la nécessité de sélectionner le régime de fixation, le bronzage et la sensibilisation des érythrocytes pour chaque type de virus ).

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Les réactions sérologiques sont désignées conformément aux phénomènes, accompagnant la formation d'un complexe d'anticorps antigène lors de l'interaction de différents composants en fonction des propriétés des composants. Distinguer les réactions d'agglutination, de précipitation et de lyse.

Réaction d'agglutination (RA)

La réaction de l'agglutination (RA) est basée sur l'utilisation d'un antigène corpusculaire (suspension de bactéries, érythrocytes sensibilisées, particules de latex, etc.), qui interagissent avec des anticorps spécifiques, ce qui entraîne un complexe d'antigène formé - l'anticorps tombe en précipité . Cette réaction est largement utilisée dans la pratique de laboratoire pour les diagnostics sérologiques des infections bactériennes et pour identifier des microorganismes isolés.

La RA est utilisée pour diagnostiquer de nombreuses maladies infectieuses: la brucellose (Wright, la réaction de Heddlson), la turléémie, la laptipirose (RAL - la réaction de l'agglutination et le listaspir), la listééiose, la typhoïde rapide (RAR - Réaction d'agglutination Rickettsis), Shigelliscize, Pseudotuberculose , etc.

Réaction d'agglutination indirecte, ou pasive, d'agglutination (riga ou RPGA).

Pour la formulation de cette réaction, des érythrocytes des animaux (béliers, singes, cobayes, certains oiseaux) sensibilisés par des anticorps ou des antigènes sont utilisés, qui est obtenu en incubant la suspension des érythrocytes et la solution d'antigène ou d'immuns.

Les diagnosticums obtenus sur la base d'érythrocytes sensibilisés par des antigènes sont appelés diagnosticums d'érythrocyte antigène. Ils sont destinés à déterminer des anticorps dans dilutions de série Sérums de sang, tels que diagnosticum cinéreur érythrocyte, érythrocyte salinellase O-diagnosticum.

En conséquence, le diagnosticum basé sur des érythrocytes, sensibilisé par une immunoglobuline spécifique, est appelé antidynamique (immunoglobuline) diagnosticumet ils servent à identifier des antigènes de divers matériaux, par exemple, des diagnostics diphérocyes d'immunoglobuline érythrocytaine pour Riga, utilisés pour détecter la diphtérie exotoxine corinbactérique dans un milieu nutritif liquide lors du semoir du nez et de l'oraloglot.

La réaction d'hémagglutination est utilisée pour diagnostiquer la bactérienne ( la fièvre typhoïde, parathie, dysenterie, brucellose, peste, choléra, etc.) et viral (grippe, infections adénovirales, cortex, etc.) infections. Selon la sensibilité et la spécificité de Riga, surpasses Ra.

Réaction de freinage de gemagglutination (rtha)

La réaction de freinage de l'hémagglutination (RTHA) est utilisée pour titrer des anticorps antiviraux dans des sérums, ainsi que pour établir une affiliation typique de cultures virales sélectionnées. RTGA peut être appliqué au diagnostic de ces infections de virus dont les agents pathogènes ont des propriétés d'hémagglutinisation.

Le principe de la méthode est que le sérum contenant des anticorps à un type spécifique de virus supprime son activité d'hémagglutinisation et que les globules rouges restent non respectueux.

Réaction de freinage (délai) de l'hémagglutination passive (RTPGA).

Trois composantes sont impliquées dans la RTPGA: sérum immunitaire, antigène (matériel étudié) et sensibilisé des globules rouges.

S'il y a un antigène dans le matériau à l'étude, qui réagit spécifiquement avec des anticorps sériques standard immuns, il les lie, et lors de l'ajout ultérieur d'érythrocytes, sensibilisé par antigène, sérum homologue, hémagglutination ne se produit pas.

Le RTPGA est utilisé pour détecter des antigènes microbiens, pour les quantifier, ainsi que surveiller la spécificité de la RPGA.

Réaction d'agglutination en latex (RLA)

Les particules de latex sont utilisées comme support d'anticorps (immunoglobulines). Le RLA est une méthode expresse pour le diagnostic de maladies infectieuses, compte tenu du temps (jusqu'à 10 minutes) et la capacité de détecter un antigène dans une petite quantité de matériau à l'étude.

Le RLL est utilisé pour indiquer les antigènes pneumoniaes Streptococcus, Haemophilus Haemophilus Haemophilus Type B, Neisseria Méningitidis dans le fluide céphalo-rachidien, détectant des groupes streptococciques A dans les traits du ZeV, pour le diagnostic de la salmonellose, de la pivoteuse et des autres maladies. La sensibilité de la méthode est de 1 à 10 ng / ml, ou des cellules bactériennes de 10³ -10⁶ dans 1 μl.

Réaction de coagglutination (RKOA)

La réaction de la coaggglutination (RKOA) est basée sur la capacité de protéine A Staphylococcus pour attacher des immunoglobulines spécifiques. Le RCA est la méthode de diagnostic express - il sert à identifier des antigènes thermostables solubles chez les secrets humains et dans le cadre de complexes immunitaires en circulation (CEC). La détection d'antigènes spécifiques dans la composition de la CEC nécessite leurs précipitations préliminaires du sérum.

Réaction précipitée

Dans la réaction des précipitations (RP), à la suite de l'interaction des anticorps avec des antigènes solubles très dispersés (protéines, polysaccharides), des complexes sont formés impliquant un complément - précipités. Il s'agit d'un test sensible utilisé pour identifier et caractériser une variété d'antigènes et d'anticorps. L'exemple le plus simple d'une RP de haute qualité est la formation d'une bande de précipitation opaque dans un tube à la limite de la superposition de l'antigène sur le sérum immunitaire - la réaction du cancer de l'anneau. Diverses variétés de RP sont largement utilisées dans les gels semi-liquides d'agar ou d'agarose (méthode de double immunodiffusion, méthode d'immunodiffusion radiale, immunodélectrophorèse).

Complément de réaction de liaison (RSK)

Le complément de réponse de liaison (RSK) est basé sur le phénomène de l'hémolyse avec la participation du complément, c'est-à-dire Il est capable d'identifier uniquement des anticorps de complément.

Le RSK est largement utilisé pour diagnostiquer de nombreuses infections bactériennes et virales, ricketsiose, chlamydia, mononucléose infectieuse, infections protozoïques, helminthoses. RSK est une réaction sérologique complexe dans laquelle deux systèmes sont impliqués: l'étude (sérum sanguin), représentée par le système d'anticorps antigène et complément et hémolytique (bélier érythrocytes + sérum hémolytique). Le sérum hémolytique est un hassion inactivé d'un sérum sanguin de lapin, immunisé avec des érythrocytes viols. Il contient des anticorps contre les érythrocytes de RAM.

Le résultat positif de la RSK est l'absence d'hémolyse - est observée si dans le sérum de test contient des anticorps, un antigène homologue. Dans ce cas, le complexe formé de l'anticorps antigène lie le complément et en l'absence d'un complément libre, l'ajout d'un système hémolytique n'est pas accompagné d'une hémolyse. En l'absence d'anticorps correspondant à l'antigène dans le sérum, le complexe antigène ne se produit pas, le complément reste libre et le sérum provoque l'hémolyse des érythrocytes, c'est-à-dire La présence d'hémolyse est un résultat négatif de la réaction.

Yuschuk N.D., hongrois Y.YU.

Il est basé sur le fait que les érythrocytes sur lesquels les antigènes sont pré-adsorbés, la capacité d'agglutiner en présence de sérums homologues (anticorps) est acquis.

Les érythrocytes effectuent en même temps le rôle des transporteurs avec des déterminants spécifiques, dont l'agglutination se produit à la suite de la réaction de l'anticorps antigène +.

Les érythrocytes, à la surface de laquelle des antigènes sont fermement attachés, appelés diagnosticum antigénique d'érythrocyte ou érythrocytes, antigène sensibilisé.

Un autre type d'anticorps terlandais et une agglutination ultérieure se produit à la surface des érythrocytes, puis leur agglutination se produit en présence d'un antigène homologue. Dans ce cas, de tels érythrocytes sont appelés diagnostic antihibe, d'érythrocytes, d'érythrocytes, d'anticorps sensibilisés.

Sur la base de ces deux approches méthodologiques fondamentales, de nombreuses modifications de bagues sont développées et utilisées. Ainsi, lorsque les transporteurs utilisent de petites particules de latex standard. Dans ce cas, la réaction s'appelle la réaction de l'agglutination de latex (RLD) ou de la staphylococcie d'or est utilisée - la réaction de la coaggglutination, etc. Habituellement, les diagnosticums d'érythrocyte sont préparés aux entreprises de l'industrie biologique et dans les laboratoires de diagnostic il y a Expérience de bague déjà principale.

La préparation des diagnosticums d'érythrocyte comprend les étapes suivantes:

• fixation d'érythrocytes avec formaldéhyde ou glutar, ou aldéhydes acryliques. Ces érythrocytes traités restent depuis longtemps. Plus souvent à cet effet, les érythrocytes de la RAM, de l'homme, des poulets, etc.
• traitement des érythrocytes fixes avec une solution de tanin. En conséquence, les globules rouges acquièrent la propriété de manière irréversiblement adsorbée sur ses protéines de surface (virus et anticorps);
• sensibilisation des globules rouges bronzés avec des virus ou des anticorps.

Il convient de noter que les méthodes de préparation des diagnosticums d'érythrocyte pour les infections virales sont différentes.

La méthodologie de Rung pour détecter et déterminer le titre d'anticorps est la suivante:

• les dilutions sériques 2-pliales séquentielles Ajoutez des doses égales d'érythrocytes sensibilisées par l'antigène;
• le mélange est autorisé pendant 2-3 heures à la température ambiante ou à 16-18 heures à 4 ° C;
• compte tenu des résultats. Si le sérum contient des anticorps au virus, qui sont sensibilisés aux globules rouges, sont observés par hémagglutination, estimée dans les croix.

Pour le test d'anticorps dans le sérum, la reproduction sérique la plus élevée est prise, qui fournit toujours une hémagglutination au moins deux croix.

RF est accompagné de tous les contrôles pertinents. Généralement mettre une réaction de micrométode.

Bague vous permet de résoudre les tâches de diagnostic suivantes:

• détecter des anticorps et déterminer leur titre de sérum avec un diagnosticum antigénique d'érythrocyte connu;
• détecter et identifier un virus inconnu à l'aide d'un diagnostic d'antihibe érythrocyte connu.

Les avantages de la région rlandiscitation: une sensibilité élevée, une simplicité de techniques de performance et de la réponse rapide. Cependant, il est important de noter qu'il existe de grandes difficultés dans la préparation de diagnosticums d'érythrocyte stables (une grande dépendance à la pureté des composants utilisés, la nécessité de sélectionner le régime de fixation, le bronzage et la sensibilisation des érythrocytes pour chaque type de virus ).

Leçon 14.

Sujet: Réactions sérologiques indirectes. Réactions d'hémagglutination indirecte (RF), complément de liaison (RSK).

Anticorps

Les anticorps sont des molécules de protéines capables de reliure spécifique aux antigènes. Les anticorps concernent la gamma globuline. Un autre nom d'anticorps est des immunoglobulines. Dans les mammifères, il y a 5 classes d'immunoglobulines qui diffèrent dans leur structure et certaines propriétés: IgG, IgM, IGA, IgE, IGD.

La structure de l'immunoglobuline. La structure la plus "typique" a une IgG. La molécule se compose de 4 chaînes de protéines: deux poumons (L) et deux lourds (h), interconnectés par des liaisons disulfure. Le site d'anticorps qui se lie à l'antigène s'appelle le centre actif de l'anticorps. Il y a 2 centres actifs dans la molécule d'IgG. Il est formé par des sections N-terminales de chaînes graves et lumineuses. La section de la chaîne lourde située à proximité de cravates disulfure est appelée zone de charnière. En utilisant la papaïne enzymatique, la molécule IgG au-dessus de la région de charnière est divisée en 3 fragments: 2 d'entre eux contiennent une chaîne de lumière et une partie de la chaîne lourde (fragments fabuleux); Un troisième fragment consiste uniquement à des chaînes lourdes (fragment FC). Grâce à la région de charnière mobile, des fragments Fab peuvent changer l'emplacement mutuel dans l'espace.

Les séquences d'acides aminés des poumons et des chaînes lourdes sont divisées en sections constantes (constantes) et variables. Les sections variables sont situées aux N-bouts des poumons et des chaînes lourdes (VL et VH). Les sites constants sont dans les chaînes de fines celles (CL et CH). Dans les poumons et les chaînes lourdes, des séquences d'acides aminés forment plusieurs structures globulaires appelées domaines.

Le centre actif de l'anticorps est formé par des domaines variables de chaînes lumineuses et lourdes et est une cavité ( paratop.) avoir une certaine configuration et distribution de charges électriques sur sa surface. La taille, la forme et la distribution des charges dans le centre actif détermine sa spécificité, c'est-à-dire la capacité de communiquer avec un certain déterminant antigénique ( Épitope) avoir une structure complémentaire.

Les déterminants antigéniques sont des zones dépassant la surface des molécules d'antigène. Par conséquent, l'interaction du paractop de l'épitope se produit en fonction du principe du "château".

La force du centre actif des anticorps avec déterminant antigénique est caractérisée par le concept d'affinité. Affinité - Il s'agit d'une mesure de l'affinité des déterminants actifs du Centre et des Antigéniques.

La part des immunoglobulines de la classe IgG représente 75% de la quantité totale d'immunoglobulines sériques. Une propriété importante d'IgG est leur capacité à traverser le placenta. Ainsi, les anticorps maternels tombent dans le corps de l'enfant et la protègent dans les premiers mois de la vie de l'infection (immunité passive naturelle).

La classe IGM comprend environ 10% du total de la piscine d'émuloglobuline. La molécule d'IgM est un penter, c'est-à-dire composé de 5 molécules identiques similaires à sa structure avec une molécule IgG, dispose de 10 centres actifs. Les sous-unités sont interconnectées par des obligations disulfure. La molécule IgM a une chaîne J supplémentaire qui relie les sous-unités. Les anticorps de classe IgM ne passent pas par une barrière placentaire.

Les anticorps de classe IGA sont de 15 à 20% de la teneur totale en immunoglobulines. La molécule IGA se compose de 2 poumons et de 2 chaînes lourdes, a 2 centres actifs. Dans le sérum, IGA est présent sous forme monomère, tandis que dans les secrets des membranes muqueuses IGA sont présentés en dimères et sont appelés sécrétoires ou siga, ont 4 centres actifs. Les C-extrémités des chaînes lourdes dans la molécule SIGA sont interconnectées par une chaîne J et une molécule de protéine, appelée composante sécrétoire. Le composant sécrétoire protège SIGA de la scission des enzymes protéolytiques, qui sont contenues en grande quantité dans la sécrétion de membranes muqueuses. La fonction principale de SIGA est la protection des membranes muqueuses de l'infection. IGA ne pénètre pas dans la barrière placentaire. La forte concentration de SIGA se trouve dans le lait maternel femelle, en particulier dans les premiers jours de lactation. Ils protègent gastro-intestinal Nouveau-né de l'infection.

L'IGD est principalement situé sur le diaphragme en lymphocytes. Il existe une structure similaire à IgG, 2 Centre actif. Le rôle biologique n'est pas encore connu.

IG - La concentration de cette classe d'immunoglobulines dans le sérum est extrêmement faible. Les molécules IGA sont principalement fixées sur la surface des cellules adipeuses et des basophiles. Par sa structure, Ig est similaire à IgG, a 2 centres actifs. On suppose que l'IGE est essentielle dans le développement de l'immunité antihelminmintose. L'IGE joue un rôle majeur dans la pathogenèse de certaines maladies allergiques (asthme bronchique, foin) et choc anaphylactique.

Réaction de l'hémagglutination indirecte

Dans les réactions sérologiques indirectes, un complexe d'antigènes avec des anticorps n'est pas visible à l'œil nu. Dans de tels cas, les antigènes sont adsorbés sur des particules de support plus grandes (érythrocytes, particules de latex), recevant un diagnostic de l'érythrocyte antigénique. L'agglutination ultérieure avec des anticorps spécifiques de ces particules vous permet de voir Agglutinat (précipité) avec un œil nu. La réaction de l'hémagglutination indirecte (passive) (RNG) révèle des anticorps sériques à l'aide d'un diagnostic de l'érythrocyte antigénique, qui est des érythrocytes avec des antigènes adsorbés sur eux.

Les érythrocytes avec des antigènes adsorbés sur eux interagissent avec des anticorps sériques appropriés, ce qui provoque un collage et une chute d'érythrocytes au fond du tube à essai ou de la cellule sous la forme d'un sédiment plus rapide. Avec une réaction négative, l'érythrocyte est réglé sous la forme d'un bouton.

La plage est placée dans des comprimés en plastique ou dans des tubes à essai avec des dilutions sériques, à laquelle le diagnosticum érythrocytaire est ajouté.

Parfois, un diagnosticum de globules rouges majeurs est utilisé - les globules rouges sur lesquels des anticorps sont adsorbés. Cette réaction est appelée Ronga - réaction dans l'hémagglutination inversée indirecte.

Composants de la bague:

Sérum de sang malade (reproduction 1:25);

Diagnostics érythrocytaries (globules rouges chargés par un antigène de l'agent pathogène étudié);

Solution de déchets.

Déclaration de sonnerie. Dans les sept trous de la tablette pour des études immunologiques, deux gouttes de solution tampon de phosphate sont fabriquées. Deux gouttes du sérum sanguin du patient sont ajoutées au premier trou, après quoi il y a 2 gouttes dans le deuxième trou du premier puits, de la seconde au troisième, etc., 2 gouttes sont retirées du sixième puits. Les sept trous (6 expérimentés et 1 contrôle) ajoutent 2 gouttes de diagnosticum d'érythrocyte. Après chaque opération, il est nécessaire de rincer la pipette dans la solution de lavage. Les plaques sont laissées à la température ambiante pendant 45 minutes, après quoi elles prennent en compte les résultats.

Réaction de liaison complète

La réponse à la liaison complète est que lorsque l'antigène est connecté à l'anticorps, un complexe immunitaire est formé, auquel le complément est relié à travers le fragment FC des anticorps. Si le complexe antigène avec un anticorps n'est pas formé, le complément reste libre. Le complément libre est détecté en ajoutant un système hémolytique à un mélange constitué d'érythrocytes et d'anticorps viols contre eux. Une réaction positive est l'absence d'hémolyse résultant d'une complément de liaison avec un complexe d'anticorps antigène +. Réaction négative - La présence d'hémolyse résultant de la liaison du complément avec le complexe d'érythrocyte + anticorps anti-Raccitar.

Composants RSK:

Sérum sanguin en bonne santé;

Sérum de sang malade (en dilution 1: 5);

Le composant antigénique de la réaction est un agent pathogène inactivé;

Compléter la reproduction correspondant à la dose de travail. Le complément est obtenu à partir du sérum du cobaye. Le titre de complément est sa dose minimale, qui, en présence de sérum hémolytique, provoque une hémolyse complète de globules rouges. La dose de travail du complément utilisé dans la production de RSK, 30% de plus de son titre;

Le système hémolytique est la suspension des érythrocytes curateurs traités avec des anticorps de lapin aux érythrocytes branomètres.

Solution de lavage.

Statution de RSK. RSK mettez dans deux tubes de test - expérimenté et contrôle. Dans un tube expérimental, 0,5 ml du sérum sanguin du patient est fabriqué, 0,5 ml du sérum sanguin d'un donneur sain est introduit dans le tube de commande, dans les deux tubes à essai de 0,5 ml de lysat pathogène, ainsi que comme 0,5 ml de complément. Après chaque opération, il est nécessaire de rincer la pipette dans la solution de lavage. Les tubes à essai sont placés dans un thermostat à une température de 37 ° C pendant 30 minutes. Après incubation dans les deux tubes à essai, 1,0 ml du système hémolytique est fabriqué. Tubes à essai Shake et placés dans un thermostat à une température de 37 ° C pendant 30 minutes. Avec une réaction positive dans un tube expérimental, le délai d'hémolyse (sans liquide et sédiment d'érythrocytes) est noté, dans le tube de commande - hémolyse des globules rouges.

Littérature pour la formation pour la leçon:

1. Microbiologie Borisov, virologie, immunologie. M., 2002.

2. Microbiologie médicale, virologie et immunologie. Ed. . M., 2004.

3. Microbiologie pozddeev. M., GOOTAR Media, 2005.